| | | |  | | | | | 동충하초의 인체폐암세포 증식 억제에 관한 연구 | |
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| | | 박사논문 <동충하초의 인체폐암세포 증식 억제에 관한 연구>
목 차 (目 次)
Ⅰ. 서 론(緖 論)
Ⅱ 실험재료(實驗材料) 및 방법(方法)
1. 암세포 배양
2. 동충하초(冬蟲夏草) 수용액의 추출물 및 처리
3. Hematocytometer를 이용한 세포 생존률의 측정
4. DAPI staining을 통한 암세포 핵의 형태 관찰
5. DNA flow cytometry에 의한 세포주기 분석
6. SDS-polyacrylamide gel 전기영동 및 Western blot analysis
7. RT-PCR을 이용한 RNA 발현의 분석
8. In vitr caspase-3 및 -9 의 활성 측정
9. Prostaglandin E2 생성율의 측정
Ⅲ 결 과 (結 果)
1. 동충하초(冬蟲夏草) 추출물의 암세포의 성장에 미치는 영향(影響)
2. 동충하초(冬蟲夏草) 추출물에 의한 apoptosis 유도
3. 총 단백질의 발현에 미치는 동충하초(冬蟲夏草) 추출물의 영향(影響)
4. PARP. β-catenin, PLC-v1 및 Akt의 발현에 미치는 동충하초(冬蟲夏草)
추출물의 영향(影響)
5. Fas 및 Fas L 의 발현에 미치는 동충하초(冬蟲夏草) 추출물의 영향(影響)
6. Bcl-2 family의 발현에 미치는 동충하초(冬蟲夏草)추출물의 영향(影響)
7. Caspase의 발현 및 활성에 미치는 동충하초(冬蟲夏草) 추출물의 영향(影響)
8. LAP family의 발현에 미치는 동충하초(冬蟲夏草) 추출물의 영향(影響)
9. COXs 의 발현 및 PGE2의 생성에 미치는 동충하초(冬蟲夏草) 추출물의 영향(影響)
Ⅰ 서 론 (緖 論)
폐암은 발생빈도가 높은 악성종양의 하나로 최근 세계적으로 발병률과 사망률이 계속 상승하고 있다. 우리나라에서도 폐암은 발생빈도가 높은 악성종양의 하나로 계속 상승하고 있어 26.2%의 사인별 사망률을 보여주고 있는데, 폐암의 원인으로는 흡연, 대기오염, 직업(석면, 우라늄)과 유전적 요인 등이 알려져 있다.
한의학(韓醫學)의 문헌에 폐암이라는 병명이 언급되지는 않았지만, 폐적(肺積), 폐저(肺疽), 식분(息賁), 폐옹(肺癰) 등의 병증이 폐암의 범주에 속한다고 볼 수 있는데, 그 병인 병기는 사독침폐(邪毒侵肺), 담습내취(痰濕內聚), 정기내허(正氣內虛)로 요약되며, 자음청폐(滋陰淸肺), 온양익기(溫陽益氣), 활혈화어(活血化於)의 방법으로 주요 치법(治法)을 삼고 있다.
동충하초(冬蟲夏草)는 맥각균(麥角菌)과에 속하는 동충하초균(冬蟲夏草菌)의 자실체(子實體)와 기생주(奇生主)의 유충(幼蟲)의 사체(死體)를 건조한 것으로, 주로 온도 습도가 높아지는 시기에 살아있는 곤충(昆蟲)의 몸 속으로 들어가 발육(發育), 증식(增殖)하면서 기주곤충(寄主昆蟲)을 죽이고 얼마 후 자실체(子實體)를 곤충(昆蟲)의 표피에 형성하는 일종의 약용버섯이다.
현대 약리학적으로는 동충하초(冬蟲夏草)가 기관지의 확장작용(擴張作用), 진정작용(鎭靜作用), 항종유작용(抗腫?作用) 등 유효한 약리작용이 있는 것으로 밝혀지고 있으며, 특히 Cordycepin 과 다당체에 항암효과가 있는 것으로 보고되고 있다.
한의학(韓醫學)에서는 동충하초(冬蟲夏草)는 성미(性味)가 감(甘), 온(溫)하고 무독(無毒)하며 익신보폐(益腎補肺), 지해화담(止咳化淡) 등의 효능이 있어 신허양이(腎虛陽이, 폐허구해(肺虛久咳), 요술산연(腰술酸軟), 몽유활정(夢遺滑精), 이명(耳鳴), 병후체허(病後體虛), 자한(自汗) 등의 병증을 치료한다.
동충하초(冬蟲夏草)를 이용한 암에 대한 연구는 정 등 이 동충하초(冬蟲夏草)의 면역조절 및 항암효과를, 김 등 이 동충하초(冬蟲夏草)가 사염화탄소로 유발된 간 손상 및 간암세포증식에 미치는 영향을, 김 등 이 Caspase-3을 경유한 동충하초 자실체 유래 4-Acetyl-12, 13-epoxyl-9-trichothecene-3, 15-diol의 방광암 세포주(NBT-Ⅱ) Apoptosis 에 관한 연구를 하였으나, 인체 폐암세포에 관한 연구는 없었기에 동충하초(冬蟲夏草)의 항암작용을 조사하기 위하여 A549 인체 폐암세포주를 이용하여 동충하초(冬蟲夏草) 열수 추출물의 처리에 따른 암세포의 증식억제에 연관된 연구를 시도하여 유의성 있는 결과를 얻었기에 이에 보고하는 바이다.
결 론(結論)
동충하초(冬蟲夏草)의 인체 폐암세포 증식억제에 미치는 영향을 실험한 결과 다음과 같다.
1. 동충하초(冬蟲夏草) 추출물의 처리 후 농도 의존적으로 A549 폐암세포의 생존율은 현저하게 감소되었다.
2. 동충하초(冬蟲夏草) 추출물 처리에 의한 폐암세포의 증식억제는 염색질응축에 의한 apoptotic body 의 출현을 동반한 apoptosis유발과 연관이 있었으나, 전형적인 apoptosis 에 의한 세포사에서 관찰되는 β-catenin, PARP 및 PLC-v1 등 표적 단백질들의 발현저하 및 분해현상은 관찰되지 않았으며, Akt,의 발현에도 아무런 영향이 없었다.
3. 동충하초(冬蟲夏草)추출물 처리에 의한 Fas 및 Fas L의 전사 수준에는 아무런 영향을 주지 않았다.
4. 동충하초(冬蟲夏草)추출물 처리에 의하여 apoptosis 억제에 관여하는 Bcl-2 family 유전자중 Bcl-X L 의 mRNA 발현이 다소 감소되었다.
5. 동충하초(冬蟲夏草)추출물 처리에 의한 A549 폐암세포의 apoptosis 유발은 caspase-3
및 caspase-9 의 활성화와 연관성이 있었다.
6. 동충하초(冬蟲夏草) 추출물의 처리에 의하여 LAP family 에 속하는 유전자들의 발현이 선택적으로 감소되었다.
7. 동충하초(冬蟲夏草) 추출물 처리에 의한 폐암세포 증식억제 및 apoptosis 유발에는 COX-2 특이적인 발현의 억제와 그에 따른 PGE2 생성이 동충하초(冬蟲夏草) 추출물 처리 농도 의존적으로 감소되었다.
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